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Fédération de Russie Patent RU2063681

MÉTHODE DE CROISSANCE DES CULTURES DE PLANTES IN VITRO ET terrain fertile pour les SA MISE EN ŒUVRE

MÉTHODE DE CROISSANCE DES CULTURES DE PLANTES IN VITRO
Et un terrain fertile pour son application

Nom de l'inventeur: Vysotsky, VA
Le nom du titulaire du brevet: All-Russia Institut Sélection-technologique de l' horticulture et des pépinières
Adresse de correspondance:
Date de début du brevet: 01.10.1992

Utilisation: l'agriculture et la biotechnologie. Résumé de l'invention: la culture in vitro des cultures est dans la préparation du milieu nourricier et à l'introduire bioingibitora, l'atterrissage expiant et la culture ultérieure, lorsque introduite bioingibitora acaricide insecticide du groupe des pyréthroïdes. Le milieu nutritif comprend des macro- et micro-éléments, des vitamines, des régulateurs de croissance et d'autres additifs, caractérisé en ce qu'il contient en outre un acaricide insecticide du groupe des pyréthroïdes, en une quantité 20,0-1200,0 mg / l de milieu.

DESCRIPTION DE L'INVENTION

L'invention concerne la biotechnologie végétale, notamment pour la micropropagation des plantes en milieu artificiel.

Dans le procédé de culture de cultures stériles peuvent être infectées par des bactéries, des champignons et autres organismes. Il existe des moyens de réduire les sources de contamination par les pré-lavage, les explants, stérilisation divers produits chimiques et le respect de la stérilité dans explants d'administration des opérations de culture stérile et pour la transplantation sous-culture [1]

On connaît un procédé qui réduit la récolte earazhennost pendant la culture prolongée, qui consiste à incorporer des nutriments antibiotiques de médias, en particulier la tétracycline, ce qui réduit la survie de certains micro-organismes capturés accidentellement sur la surface du support lors de l'directe [2]

Il existe des méthodes qui empêchent la dispersion des tiques dans les zones de culture et les cultures de recontamination, consistant dans la fumigation des installations de laboratoire et les différents types d'utilisation externe de produits chimiques [3]

Inconvénients de ces procédés connus et milieu de culture sont qu'ils ne fournissent pas une protection fiable des cultures se déplaçant activement les parasites quelles sont les acariens et leurs larves. Cela est dû au fait que pénétra dans les vaisseaux de culture acariens peuvent y proliférer, puis déposer sur debout à côté des navires, portant sur les spores microbiennes de la surface du corps. Les nouveaux navires de culture, ce processus est répété, et si elle n'interrompt pas, il devient une avalanche, et entraîne une perte importante de matière.

Le terreau bien connu [2] contenant des antibiotiques, ne peut pas empêcher la reproduction et le développement des acariens chez les larves in vitro.

Le problème à résoudre par l'invention est d'améliorer la protection in vitro contre les organismes nuisibles dans les vaisseaux de culture de cultures et d'augmenter le rendement des cultures cultures stériles en éliminant la possibilité d'une infection pendant l'incubation.

L'objet déclaré est atteint en ce que le fichier est en mesure de protéger les cultures in vitro, comprenant la préparation d'un milieu de culture, et le traitement des explants atterrissage acaricides dans un milieu nutritif pour la culture in vitro de cultures est administré avant l'autoclavage acaricide-insecticide du groupe des pyréthroïdes, suivie par l'atterrissage de l'expiant.

Le problème est résolu, et le fait que le terreau pour la protection de la méthode de culture in vitro de parasites, y compris le nitrate d'ammonium, le nitrate de potassium, le sulfate de magnésium, le phosphate de potassium, chlorure de calcium, l'acide borique, le sulfate de manganèse, sulfate de zinc, l'iodure de potassium, le molybdate de sodium , le sulfate de cuivre, le chlorure de cobalt, le sulfate de fer, Trilon B, la thiamine, la pyridoxine, l'acide nicotinique, l'acide ascorbique, le saccharose, l'agar-agar, la 6-benzylaminopurine, et de l'eau, comprenant en outre un insecticide, un acaricide du groupe des pyréthroïdes le rapport suivant des composants, en mg / l: 1640-1660 nitrate d'ammonium, le nitrate de potassium, 1890-1910, 430-450 chlorure de calcium, le sulfate de magnésium, 360-380, 160-180, phosphate de potassium, le sulfate de fer, - 55-56, le sulfate de manganèse 22,2-22, 4, le sulfate de zinc, de 8,5 à 8,7, l'iodure de potassium, 0,82-0,84, 0,24-0,26 molybdate de sodium, le sulfate de cuivre - 0,024-0,026, 0,024-0,026 chlorure de cobalt, l'acide borique, 6,1 -6,3, Trilon B 74-76, thiamine 0,4 à 0,6, 0,4 à 0,6, la pyridoxine, l'acide nicotinique - 0,4 à 0,6, 0,9-1,1, l'acide ascorbique, 6-benzylaminopurine 0,2-3,0, 2-40000 sucrose, l'agar-agar, 5500-8500, dans le groupe des pyréthrinoïdes insectoacaricide - 100-1100, l'eau reste.

Il est proposé l'utilisation d'un milieu nutritif, ce qui conduit à la mort des acariens dans des récipients de culture, un insecticide, un acaricide, contenant les concentrations indiquées, selon le procédé fournit des cultures d'obtention, les fonds ne sont pas infectés et l'incapacité d'une réinfection de culture stérile dans des récipients de culture de l'autre. Cela conduit à la conclusion que l'invention revendiquée interconnectée seul concept inventif.

Comparaison des solutions techniques proposées avec le prototype a permis d'établir leur conformité avec le critère de la «nouveauté», parce il contient une nouvelle méthode technologique et une nouvelle composante du milieu de culture insecticide-acaricide du groupe des pyréthrinoïdes.

La solution proposée est pas évident pour ceux qui sont engagés dans la culture du stérile dans la culture in vitro, comme si la source de l'information [3] et il est connu l'utilisation de acaricide pour protéger les cultures stériles contre les parasites, mais dans ce procédé connu acaricide ajouté à la peinture, qui peint les surfaces des équipements laboratoire ou de l'appliquer pour fumiger la chambre qui traite pleinement les questions de protection des cultures in vitro de parasites, d'ailleurs, que dans ces cas, l'utilisation d'acaricides un autre groupe.

Dans l'étude d'autres solutions techniques connues dans ce domaine les caractéristiques qui distinguent l'invention revendiquée dans l'art antérieur, il n'a pas été détecté. Par conséquent, nous pouvons conclure que la solution technique revendiquée a inventive.

EXEMPLES DE MÉTHODE DE MISE EN ŒUVRE

Exemple 1. Préparé milieu d'agar nutritif constitué de sels minéraux prescription de Murashige-Skoog mg pour 1 litre de solution: nitrate d'ammonium 1650 Nitrate de potassium 1,900 chlorure 440 de calcium, le sulfate de magnésium, 370, 170 phosphate de potassium, le sulfate de fer - 55,6, Trilon B 74,6, 6,2 acide borique, le sulfate de manganèse, 22,2, le sulfate de zinc, 8,6, 0,83 iodure de potassium, le molybdate de sodium 0,25, sulfate de cuivre 0,025, le chlorure de cobalt, 0025 vitaminée - thiamine, la pyridoxine, nicotinique acide ascorbique 0,5 1,0 saccharose 30000, l'agar-agar, 7000, 6-benzylaminopurine 1,0, qui est faite avant autoclavage groupe pyréthrinoïde acaricide-insecticide des quantités suivantes de mg / l: 0 (témoin) , 10, 25, 50, 100, 200, 500, 1000, 1200, 1500 et 2000. Le milieu préparé a été porté au reflux, on verse dans des récipients de culture et on le soumet à une stérilisation à la chaleur dans un autoclave à 1 atm pendant 15-20 minutes.

Après refroidissement à la surface du milieu à bord explants hybrides Malino-blackberry Teyberri et Sunberry. Les navires avec des explants bouleversé ont été placés dans une chambre de culture dans laquelle il y avait des cas de destruction des cultures évasées. A été enregistrée après 10, 20 et 30 jours, qui a été isolée représente terrain de 625 centimètres carrés, ce qui était 25 navires de culture. infection Noté par les bactéries et les cultures de champignons. La présence d'acariens ont été détectés par les navires directs de culture de la microscopie au microscope stéréoscopique MBS-9. Les résultats des observations sont présentées dans le tableau. 1. Comme le montrent les données du tableau 1, l'effet acaricide est un démarrage fiable avec une concentration de 25 mg / l de la formulation. Pour étudier la possible insecticide d'action phytotoxique, acaricide effectué le calcul du facteur de multiplication moyen pour chaque option et déterminer la longueur moyenne de la pousse. Les données récapitulatives sont présentées dans le tableau 2.

Le traitement des données a montré une réduction significative du niveau de signification de 0,01% en tant que facteur de multiplication (F = 56,2), et la longueur moyenne des pousses (F = 37,8) dans le milieu à des concentrations d'insecticide, acaricide, 1500 et 2000 mg / l.

Exemple 2. Sur préparé ci-dessus moyen méthode de nutriments avec l'inclusion d'insecticide, acaricide des groupes pyréthroïdes à des concentrations de 10, 20, 50, 100, 500, 1000 et 2000 mg / L ont été plantés explants de rose variété miniature Tsvergkening et après une mise en culture d'un mois dans la chambre de lumière où relevé des cas vaincre les cultures stériles infestation par les tiques des navires et le développement des explants évalués. Les résultats des observations sont présentées dans le tableau 3.

Ainsi, sur la base des données obtenues, on peut conclure que la gamme de concentrations efficaces de groupe pyréthroïde insecticide acaricide lorsqu'il est incorporé dans le milieu de culture est comprise entre 20 et 1200 mg / l. Des concentrations plus faibles ne pas interférer avec la reproduction et la dispersion des organismes nuisibles et plus ont des effets phytotoxiques sur les navires en développement dans la culture des explants de diverses cultures.

Livres d'occasion

1. Polikarpov FY Vysotsky, VA Tarashvili ZT Lignes directrices pour la micropropagation clonale de groseilles rouges et noirs. M. 1986.

2. Ivanov AI Prikhodko YN Prikhodko DP Bogomolov AA Des techniques améliorées pour la préparation des plants de fraises par méristèmes culture de apical. Dans Proc. Sélection de machines agricoles et de cultures de fruits et de baies dans le Middle Volga. livre Kuibyshev due en 1989, c.63-75.

3. Blacke J. Acariens et des voyages en tant que vecteurs bactériens et fongiques entre les cultures de tissus. Acta Horticulturae, 1988, N225, p.163-66 (prototype). TTT1 TTT2

REVENDICATIONS

1. Procédé de cultures in vitro, comprenant la préparation du milieu nutritif, l'introduction bioingibitora expiant d'atterrissage milieu et la culture ultérieure, caractérisé en ce que le insectoacaricide bioingibitora de milieu nutritif mis en place dans le groupe des pyréthrinoïdes.

2. Le milieu nutritif pour les cultures végétales in vitro, contenant du nitrate d'ammonium, le nitrate de potassium, le sulfate de magnésium, le dihydrogénophosphate de potassium, chlorure de calcium, le sulfate de fer, Trilon B, l'acide borique, le sulfate de manganèse, sulfate de zinc, l'iodure de potassium, le molybdate de sodium, le sulfate de cuivre, le chlorure de cobalt, la thiamine, la pyridoxine, l'acide nicotinique, l'acide ascorbique, le saccharose, l'agar-agar, la 6-benzylaminopurine, et de l'eau, caractérisé en ce qu 'il comprend en outre insectoacaricide dans le groupe des pyréthrinoïdes, selon le rapport suivant, en mg / l:

  • Le nitrate d'ammonium 1640-1660
  • Le nitrate de potassium 1890-1910
  • Le chlorure de calcium 430-450
  • Le sulfate de magnésium 360-380
  • Potassium Phosphate monosodique 160-180
  • sulfate de fer 55-56
  • Trilon B-74-76
  • sulfate de manganèse 22,2-22,4
  • Sulfate de zinc 8/5 à 8/7
  • L'iodure de potassium 0,82-0,84
  • le molybdate de sodium 0,24-0,26
  • Le sulfate de cuivre 0,024-0,026
  • Le chlorure de cobalt 0,024-0,026
  • L'acide borique, grade 6.1-6.3
  • thiamine 0,4-0,6
  • pyridoxine 0,4-0,6
  • niacine 0,4-0,6
  • L'acide ascorbique 0,9-1,1
  • B-benzylaminopurine 0,2-3,0
  • saccharose 20.000 à 40.000
  • Agar 5500- 8500
  • Insectoacaricide du groupe pyréthrinoïdes 20,0-1200
  • Eau à 1 litre Autres

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Date de publication 04.03.2007gg